M-MLV GIII 反轉(zhuǎn)錄酶(三代）是通過基因修飾和重組技術(shù)獲得的第三代M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶。該酶相對(duì)于野生型M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶去除了RNase H活性，并大幅提高了熱穩(wěn)定性（the best反應(yīng)溫度為50℃），從而大大提高了合成first鏈cDNA時(shí)的特異性和長(zhǎng)度（最長(zhǎng)可達(dá)12 kb），增強(qiáng)了對(duì)RNA復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)的耐受性。

產(chǎn)品型號(hào)：

更新時(shí)間：2023-11-09

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產(chǎn)品分類

分子生物學(xué)試劑

分子其他 DNA相關(guān) 內(nèi)切酶克隆相關(guān) 核酸電泳 qPCR相關(guān) 反轉(zhuǎn)錄相關(guān) PCR相關(guān) 核酸純化相關(guān)

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品牌	其他品牌	貨號(hào)	M5124
供貨周期	現(xiàn)貨

貨號(hào)：M5124

儲(chǔ)存條件：-20℃

產(chǎn)品組成

組分規(guī)格	規(guī)格
M-MLVGIII Reverse Transcriptase(200U/ul)	50ul
5×M-MLV First Strand Buffer	500ul
0.1M DTT	100ul

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

M-MLV GIII Reverse Transcriptase是通過基因修飾和重組技術(shù)獲得的第三代M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶。該酶相對(duì)于野生型M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶去除了RNase H活性，并大幅提高了熱穩(wěn)定性（the best 反應(yīng)溫度為50℃），從而大大提高了合成first鏈cDNA時(shí)的特異性和長(zhǎng)度（最長(zhǎng)可達(dá)12 kb），增強(qiáng)了對(duì)RNA復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)的耐受性。

酶活單位定義

37℃條件下，以Poly(A)-Oligo(dT)為模板/引物，在10 min內(nèi)，摻入1 nmol的[³H] dTTP所需要的酶量定義為1個(gè)活性單位（U）。

質(zhì)量控制

宿主原性DNA檢測(cè)

無宿主DNA污染

核酸內(nèi)切酶殘留檢測(cè)

將酶液與超螺旋質(zhì)粒DNA在37℃溫育4h，通過DNA電泳檢測(cè)質(zhì)粒無變化。

核酸外切酶殘留檢測(cè)

將酶液與雙鏈DNA底物在37℃溫育16h，通過DNA電泳檢測(cè)雙鏈DNA底物無變化。

使用方法

質(zhì)粒載體線性化與去磷酸化同步反應(yīng)流程

1. 于冰上配制如下反應(yīng)體系：

試劑	使用量
引物	X ul
Oligo(dT)₂₀	終濃度2.5uM
或隨機(jī)引物	終濃度2.5ng/ul
或基因特異性引物	終濃度0.25uM
模板 RNAa	50 ng~1ug/20ul
5× M-MLV First Strand Buffer	4ul
0.1 M DTT	1ul
M-MLV GIII Reverse Transcriptase (200 U/ul)	1ul
dNTP Mix (10 mM Each)	1ul
（可選）RNase Inhibitor (40 U/ul)	1ul
Nuclease-Free Water	To 20ul