說 明

α-Amylase，系統名稱為1,4-α-D-葡聚糖葡聚糖水解酶，別名為液化型Amylase、液化酶、α-1，4-糊精酶。黃褐色固體粉末或黃褐色至深褐色液體，含水量5%~8%。溶于水，不溶于乙醇或乙mi。α-Amylase是哺乳動物的一種主要消化酶，人體中Amylase水平的增加與唾液腺創傷，及唾液腺、胰腺發炎和腎功能衰竭引起的腮腺炎有關。本公司的α-Amylase測試盒運用α-Amylase裂解一種不溶性藍色直鏈淀粉成可溶性有色產物，在595nm處的吸光強度與樣品中Amylase的活性成正比。檢測范圍2 - 300 U/L。

應 用

直接檢測血清、血漿、唾液、尿液和其它生物樣品中α-Amylase的活性。

試劑盒組成與保存

底物試劑:   10 mL                              2-8°C保存

終止試劑:      5 mL                      2-8°C保存

校準液:  2 mL (相當于 550 U/L)               2-8°C保存

檢測步驟

樣品準備：新鮮的樣品最為理想。 冷凍條件下，α-Amylase一個月內保持穩定。EDTA, EGTA和檸檬酸鹽是α-Amylase的抑制劑，在樣品準備中應避免使用。

1. 反應：在標記好的1.5mL離心管中加入10 mL 樣品。然后加入 190 mL 底物試劑，振蕩混合后培養5分鐘。

注意：底物試劑包含的藍色不溶性物質會形成沉淀。量取前應當倒置瓶10數次以使底物維持懸浮狀，再迅速將底物轉移到樣品離心管。如果測試要在 37°C下進行，應在添加樣品之前將底物加熱至該溫度。

 對空白對照管，需加10 mL水, 190 mL 底物試劑和 80 mL 終止試劑。或者按以下順序準備空白對照：10 mL 樣品， 80 mL 終止試劑和190 mL 底物試劑。 如果樣品背景顏色是明顯的藍色，這一步很必要。

2. 將80 mL 終止試劑加入每個樣品離心管中。振蕩混合并以14,000 rpm速度離心5分鐘，小心地將200 mL 上清液轉移至透明平底96孔板的孔中。

3.在不同的孔中，加入200 mL 水和 200 mL 校準液。讀取595nm 處吸光度。

4. 濃度計算: α-Amylase活性計算如下：

OD樣品 和OD空白 分別是樣品和空白的OD595nm 值，OD校準液 和 ODH2O 分別是校準液和水的OD595nm值。n 是稀釋系數，“550" 是校準液在測試環境下的等效活性(U/L)。

注：如果計算出的活性高于300 U/L，將樣品用水稀釋后重復測試，結果需要乘以稀釋系數n。

單位定義：在測試環境下(pH 7.0)，一個酶活性單位是指每分鐘催化產生1 mmole 產物。

注意事項：本產品僅供研究用，使用過程中應嚴格遵循實驗安全措施。