貨號：B5003

存儲條件：冰袋運輸。試劑盒中A、B液室溫或4℃保存；蛋?標準品（BSA）?時間不用，可置于-20℃保存，有效期12個?。

產品說明

快速蛋?定量試劑盒的原理與傳統BCA蛋?定量法類似，但采用了?種不同于BCA(Bicin-choninicAcid)的全新特殊的螯合劑，從而實現了對蛋?質濃度進?快速、穩定、靈敏的測定。其原理是在堿性環境下蛋?質分?中的肽鍵能與Cu2+形成絡合物，將Cu2+還原成Cu+，Cu+與螯合物結合，從而發?顏?反應。本試劑盒中的螯合劑可敏感特異地與Cu+結合，只需室溫孵育5min即可形成穩定的橙???溶性復合物，而傳統BCA法則需在37℃下孵育30min才可完成顏?反應。該橙??的復合物在480nm處有強光吸收值，顏?的深淺與蛋?質濃度成正?，可根據吸收值的?小來測定蛋?質的含量。本試劑盒含有?系列濃度的蛋?質標準品溶液(BSA溶液)，即取即用，?需稀釋，方便快捷。

1）簡單快速---室溫5min完成顯?反應。

2）方便快捷---提供BSA即用型蛋?標準品，省去稀釋步驟。

3）線性范圍廣---靈敏檢測20-2000μg/mL濃度范圍內有較好的線。

4）兼容性好---不受?部分樣品中的化學物質的影響。 

操作說明（以微孔酶標儀為例）

一、配置顯色工作液

1.計算顯色工作液總量

?作液總量= (BSA標準品樣本個數＋待測樣本個數)×復孔數×每個樣本顯??作液體積

舉例：BSA標準品樣本個數為8個，待測樣本個數3個，復孔數3個。

顯??作液總量=(8個BSA標準品樣本＋3個待測樣本)×3個復孔×200μL(每個樣本?作液體積) = 6.6mL

2.根據計算出的顯色工作液需要總量，將試劑A和試劑B按照50:1的體積比，配制顯色工作液，充分混勻。

【注意】

1）試劑B剛加?試劑A時，會出現灰藍?沉淀，但只需混勻?秒鐘，沉淀就會消失，形成透亮的綠?溶液；

2）建議?作液現用現配，在室溫下，?作液會逐漸變為深綠?，但只要在1.5h內使用，對定量的準確性不會造成影響；

3）由于加樣可能存在誤差，建議配制BCA?作液時，多配制1~2個孔。

二、定量檢測

1. 分別取即用型BSA標準品①~⑧各20μL加到96孔板中( BSA標準品使用前須充分溶解搖勻)；

2. 用 1xPBS 或 0.9%生理鹽水將樣品適當稀釋(可以多作幾個梯度，如2 倍、4 倍、8 倍稀釋)，加 20 μL 到 96 孔板的樣品孔中。

3. 各孔加入 200 uL 顯色工作液，充分混勻，蓋上 96 孔板蓋，室溫孵育 5min，即可進行檢測。

【注意】由于顏色反應速度較快，須保證在 20-30 min 之內完成讀值。如果必須在 30 min 后讀值，可提前加入 50 μL 1M HCI 終止反應。 

4 . 用酶標儀測定每個樣品及 BSA 標準品的 A₄₈₀，注意要減去空白對照( 標準品① +工作液)的 A₄₈₀;

5. 繪制標準曲線，計算樣品中的蛋白濃度。

【注意】數據處理時需要去除明顯錯誤的值。待測樣品濃度可以從標準曲線中查得, 實際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數。如果是計算機繪制的曲線，可以從計算機給出的線性方程式計算出待測樣品的濃度。

6.注意事項

1)本產品可以采用酶標儀(微孔檢測法)或者分光光度計(試管檢測法)測定蛋白濃度，如使用普通的分光光度計測定，需根據比色皿的最小檢測體積，適當加大 BCA 工作液的用量使不小于最小檢測體積， 樣品和標準品的用量可相應按比例放大也可不變。使用分光光度計測定蛋白濃度時，每個試劑盒可以測定的樣品數量可能會顯著減少。

2)完成室溫孵育5 min 后，須在 20~30 min 內完成檢測，否則會影響蛋白定量的準確度。

3)實驗操作規范，提高上樣量的精確度。

4)每次測定都需做相應的標準曲線，因為顯色反應與溫度和時間的變化有關，精準蛋白定量宜每次都做標準曲線。

5)如待測樣品中含較多的干擾物質(具體見附表)，可采用其它蛋白定量產品。

6)本產品僅限于專業人員用于科學研究，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內,

7)為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。