高濃度基質(zhì)膠-不含酚紅

貨號(hào)：MG2262、MG4262、MG6262

存儲(chǔ)條件：-80℃ 保存，避免反復(fù)凍融。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

基質(zhì)膠是從Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) 小鼠肉瘤提取的可溶性細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)，含有豐富的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，主要包括層粘連蛋白、膠原IV、肝素硫酸酯蛋白聚糖、巢蛋白以及大量的生長(zhǎng)因子。

基底膠在室溫條件下，聚合形成具有生物學(xué)活性的三維基質(zhì)，模擬體內(nèi)細(xì)胞基底膜的結(jié)構(gòu)、組成、物理特性和功能，有利于體外細(xì)胞的培養(yǎng)和分化，以及對(duì)細(xì)胞形態(tài)、生化功能、遷移、侵染和基因表達(dá)的研究。基質(zhì)膠也適用于類器官生長(zhǎng)、分化、代謝和毒理學(xué)研究。高濃度的基質(zhì)膠可以用于動(dòng)物體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞包被。

操作方法：

一、薄膠成膠方法：

1. 凍融后，用預(yù)冷的移液槍頭混勻基質(zhì)膠成勻漿狀。

2. 將需要使用的培養(yǎng)板置于冰上，加入濃度為50μL/cm2 生長(zhǎng)面積的基質(zhì)膠。

3. 在 37℃放置 30 分鐘，即可使用。

二、厚膠成膠方法：

1. 凍融后，用預(yù)冷的移液槍頭混勻基質(zhì)膠成勻漿狀。

2. 將需要使用的培養(yǎng)板置于冰浴，將培養(yǎng)的細(xì)胞與基質(zhì)膠混合，用移液槍頭使其懸浮于基質(zhì)中。加入濃度為 150-200μL/cm

2 生長(zhǎng)面積的基質(zhì)膠。

3. 在 37℃放置 30 分鐘，可成膠。可以加入細(xì)胞培養(yǎng)的基質(zhì)，也可使細(xì)胞直接生長(zhǎng)在膠表面。

三、薄層包被方法：

1. 凍融后，用預(yù)冷的移液槍頭混勻基質(zhì)膠成勻漿狀。

2. 根據(jù)使用需要，采用無血清培養(yǎng)基稀釋基質(zhì)膠。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要確定最佳包被濃度。

3. 將稀釋的 基質(zhì)膠包被于所需的培養(yǎng)器皿中，包被量至少覆蓋整個(gè)器皿的生長(zhǎng)表面。室溫下孵育 1 小時(shí)。

4. 去除未結(jié)合的基質(zhì)膠，用無血清培養(yǎng)基輕輕地沖洗。

四、裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)

1.取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期腫瘤細(xì)胞，即細(xì)胞融合度達(dá)到80%~90%。

2.棄去瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)液，用PBS清洗2遍，加入0.25%含EDTA的yimei0.8~1.0 ml中，將培養(yǎng)瓶平放靜置1 min，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)，在細(xì)胞逐漸變圓或有細(xì)胞脫落時(shí)加入5 mlwanquan培養(yǎng)液終止消化。

3.吹打管輕柔吹打細(xì)胞懸液，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

4.取一定數(shù)量（每只小鼠不低于1X10^5細(xì)胞量，最高不超過1X10^7細(xì)胞/0.1ml終濃度）細(xì)胞放入15 ml離心管中，200×g離心3 min，棄上清液，用已預(yù)冷的移液器及吸頭將基質(zhì)膠和含10%FBS的腫瘤細(xì)胞wanquan培養(yǎng)液的1∶1混懸液加入離心管，輕柔吹打，避免產(chǎn)生氣泡，均勻重懸細(xì)胞，冰上放置。

5.麻醉5-6w齡的裸鼠，提前預(yù)冷微量進(jìn)樣器和針頭，用不帶針頭的 1mL 注射器將細(xì)胞和膠的混合物吸入針頭，再裝上16G-29G針頭在每只裸鼠右側(cè)背部皮下接種，左右輕柔晃動(dòng)，預(yù)留細(xì)胞懸液空間，注射量為400 μl/只。

6.動(dòng)物經(jīng)過上述處理后，每周定期觀察裸鼠生長(zhǎng)狀況，用游標(biāo)卡尺對(duì)瘤體的長(zhǎng)度（L）、寬度（W）進(jìn)行測(cè)量。體積大小按公式：V=1/2LW2進(jìn)行計(jì)算。

注意事項(xiàng)：

1.收到產(chǎn)品并確認(rèn)到貨情況無異常后，請(qǐng)將 基質(zhì)膠儲(chǔ)存于--80℃冰箱，短暫使用可置于--20℃冰箱。切勿將基質(zhì)膠儲(chǔ)存于自動(dòng)除霜的冰箱中。在第一次融化后請(qǐng)分裝保存，應(yīng)避免基質(zhì)膠反復(fù)凍融。

2.因基質(zhì)膠在 10℃以上即可成膠，在操作過程中，保持基質(zhì)膠一直置于冰上，所有接觸的細(xì)胞培養(yǎng)器皿，移液吸頭，分裝管等都必須預(yù)冷后使用。

3.所有操作均需在無菌環(huán)境下進(jìn)行，試劑瓶瓶蓋可用 70％乙醇擦拭，并自然干燥。應(yīng)使用預(yù)冷的移液器以保證基質(zhì)膠呈勻漿狀。

溶解時(shí)可將基質(zhì)膠基質(zhì)置于 4℃冰箱內(nèi)冰上過夜溶解。成膠后基質(zhì)膠可以在 4℃ 24－48 小時(shí)后重新呈液態(tài)。